Пастроне родился в Монтечьяро-д'Асти. В течение эпохи немого кино он внёс вклад в развитие кинематографа. Скончался в Турине.
В 1914 году Пастроне снял фильм Кабирия.
Готовясь к съемкам фильма, Джованни Пастроне 5 августа 1912 года запатентовал в Италии тележку, «трэвеллинг» (итал. carello). Одновременно с применением тележки Джованни Пастроне впервые ввел несколько технических приемов: прямолинейное или зигзагообразное движение, перемещение параллельно декорациям, приближение и удаление кинокамеры.
По мнению Ежи Теплица сценарий написал Джованни Пастроне, подписавшись псевдонимом Пьеро Фоско. Габриэле Д’Аннунцио же лишь поставил свое имя в титрах