Глория Фрэнсис Стьюарт (англ. Gloria Frances Stewart) родилась в Санта-Монике, штат Калифорнии, в 1910 году в семье Элис Воган Дейдрик Стюарт, дальней родственницы Джесси Джеймса, и адвоката Фрэнка Стюарта, который погиб спустя девять лет после её рождения. Воспитание Глории и её младшего брата оказалась для Элис Стюарт тяжёлой ношей, и вскоре она вновь вышла замуж за Фреда Финча, успешного коневода и владельца похоронного бюро. Отец Глории имел британские корни и носил шотландскую королевскую фамилию, однако Глория, начав актёрскую карьеру изменила написание Стьюарт (англ. Stewart) на Стюарт (англ. Stuart), посчитав, что второй вариант будет лучше смотреться на афишах.
После колледжа Стюарт работала в театре «Пасадена», а в 1932 году подписала контракт с «Universal Studios». В том же году она стала одной из тринадцати девушек в списке «WAMPAS Baby Stars». Режиссёр Джеймс Вейл сразу заметил очаровательную блондинку, и она тут же стала его фавориткой. Стюарт снялась в его фильмах «Старый тёмный дом» (1932), «Человек-невидимка» (1933) и «Поцелуй перед зеркалом» (1933).
Но её карьера в «Universal Studios» развивалась медленными темпами, и Стюарт перешла на студию «20th Century Fox». К концу 1930-х годов она снялась уже более чем в сорока фильмах, включая «Римские скандалы» (1933) и «Ребекка с фермы Саннибрук» (1938).
В 1934 году актриса вышла замуж за сценариста Артура Шикмана. В 1935 году у них родилась дочь Сильвия. В годы Второй мировой войны Стюарт почти не снималась. Она устроилась на работу в магазине «D?cor Ltd.», где продавала мебель, а в 1946 году и вовсе заявила, что устала от кино. Она давала резкие отказы на все предложения о съемках и в конце концов её оставили в покое. В 1954 году, живя в Рапалло на итальянской Ривьере, она увлеклась живописью. Первый показ её работ состоялся в престижной галерее «Hammer» в Нью-Йорке, и вскоре её произведения выставлялись уже повсюду в Европе и США.
В 1975 году, после тридцатилетнего перерыва, она возродила актёрскую карьеру, появившись в телевизионном фильме «Легенда о Лиззи Борден», и в течение следующих нескольких лет регулярно снималась в различных телевизионных проектах. Её возвращение на большой экран состоялось в 1982 году в фильме «Мой лучший год» с Питером О’Тулом в главной роли.
Огромной популярности Глория Стюарт достигла уже в возрасте 87 лет, сыграв роль 100-летней Розы Дьюитт в фильме Джеймса Кэмерона «Титаник». За эту роль актриса была номинирована на «Оскар» и «Золотой глобус», а также удостоена премии Гильдии киноатёров США и премии «Сатурн». В том же году журнал «People» внес Стюарт в список «50 самых привлекательных людей мира».
В 1999 году была опубликована автобиография актрисы «Я только продолжаю надеяться», а в 2000 году актриса была удостоена звезды на Голливудской аллее славы. В 2001 году Стюарт появилась в эпизодической роли в телефильме по мотивам сериала «Она написала убийство», а также сыграла небольшую роль в драме «Отель «Миллион долларов»». В последний раз на большом экране она появилась в 2004 году в фильме Вима Вендерса «Земля изобилия». В последние годы актриса уже не снималась и только давала редкие интервью для документальных фильмов.
«Я прекратила сниматься в 1939 году, потому что ненавидела свои роли — девушка-детектив, девушка-репортёр, подруга Ширли Темпл»
В 2005 году у актрисы обнаружили рак лёгкого, но несмотря на это она старалась не обращать большого внимания на тяжёлый недуг. 21 июня 2010 года в преддверии столетнего юбилея Глория Стюарт получила специальный приз Американской гильдии киноактеров за «безграничную преданность кинематографу». 4 июля того же года актриса отметила столетний юбилей в художественной галерее ACE в Беверли-Хиллз. Среди гостей присутствовали Джеймс Кэмерон с супругой Сьюзи Эмис, Фрэнсис Фишер, Ширли Маклейн и Том Арнольд.
Глория Стюарт скончалась от дыхательной недостаточности 26 сентября 2010 года в своём доме в городе Брентвуд, штат Калифорния.