Родился в бывшем имении Колесников (Глубокский район).
Вацлав Устинович Ластовский был активистом Белорусской социалистической громады, редакционным секретарем газеты «Наша Ніва» (с 1909 года), входил в руководство партии «Хрысціянская злучнасць», являлся Председателем Кабинета Министров Белорусской Народной Республики.
В. Ластовский выступал против советской власти и польской оккупации за независимую и целостную Белоруссию. В начале 1920-х годов он посетил ряд стран Западной Европы, где агитировал за идею независимости Белоруссии. С апреля 1927 года работал директором Белорусского государственного музея, заведующим кафедрой этнографии при Институте белорусской культуры, секретарём Белорусской академии наук. Исследовал древне-белорусскую историю, литературу и происхождение названия Белоруссия. Автор исторических литературных произведений, рассказов, воспоминаний и статей об известных деятелях белорусского национального возрождения. Переводил на белорусский язык произведения классиков русской, английской, польской и датской литературы.
Как отметил в интервью БелаПАН кандидат филологических наук Язеп Янушкевич, своим творчеством Ластовский доказал: лучшим университетом для человека является «глубоко прочитанная и добросовестно написанная книга». Несмотря на начальное четырехлетнее образование, Вацлав Ластовский стал членом-корреспондентом Украинской академии обществоведения в Праге (Чехия) в 1926 году и академиком Академии наук Белоруссии в 1928 году. «О том, что Вацлав Ластовский был ученым энциклопедистом, свидетельствует его капитальное исследование „Гісторыя беларускай (крыўскай) кнігі“, написанное в 1926 году», — отметил Я.Янушкевич. По его словам, Ластовский смог сделать больше, чем несколько академических институтов.
21 июля 1930 года вместе с другими выдающимися деятелями науки и культуры Беларуси Вацлав Ластовский был арестован Томским ГПУпо делу так называемого «Союза Освобождения Белоруссии». 6 декабря 1930 года постановлением СНК БССР лишён звания академика (восстановлено в 1990 году). 10 апреля 1931 г. осуждён к высылке на 5 лет за границы БССР в Саратов, где работал заведующим отдела редкой книги и рукописей библиотеки Саратовского университета. В начале 1938 года повторно арестован в Саратове и 23 января расстрелян. Реабилитирован в 1958 и 1988 году.
Белорусский историк А. Гронский критикует Ластовского как фальсификатора. Так, Гронский утверждает, что именно Ластовский выдумал миф о Калиновском как белорусском деятеле, а также придумал ему имя «Кастусь». Также Ластовский сфальсифицировал текст произведения Калиновского. Например, в оригинальном тексте Калиновского:
Тот же текст у Ластовского превращается в:
На основании этого Гронский утверждает, что «обращаясь к крестьянам [в газете "Мужыцкая праўда"] он [К. Калиновский] не называл их белорусами», хотя в широко известных Письмах из-под виселицы К. Калиновский писал: «…а пісьмо аддрукуйце, каб знаў свет Божы, як мужыкі Беларусы глядзяць на маскалёў і паўстанне польскае, чаго яны хочуць і чаго па сваей сіле дабіваціся будуць»
Согласно исследованиям белорусского публициста Олега Лицкевича, Ластовский сочинил ряд песен, которые выдал за аутентичные фольклорные произведения.