Диана Шпак родилась в Лос-Анджелесе, США. С двухлетнего возраста живёт в России. У Дианы есть младшая сестра Сюзанна, которая также снимается в кино.
В три года мать Дианы отнесла фотографии дочери в актёрское агентство, и почти сразу девочку начали снимать в рекламе. Сначала Диана снялась для «Киндер-сюрприза». Потом она вжилась в роль «сливы лиловой, спелой садовой» в рекламе сока «Фруктовый сад». А её коронными фразами стали «А ты налей и отойди!», «Доброе утро, мамочка!», «Тогда я умру. От жажды», «Мам, ну ты ж собаку обещала!», которые Диана произносит в серии рекламных роликов сока «Моя семья». Известно мнение сотрудников агентства, которые создавали эту серию:
Благодаря участию в этих роликах Диана получила приз за лучший женский образ 2003 года на XIII Московском международном фестивале рекламы.
В 2005 году Диана снялась в полнометражном фильме «Лесная царевна» (реж. Александр Басов, Теймураз Эсадзе).
В 2005—2006 г. Диана была занята в съёмках популярного ситкома «Люба, дети и завод», транслировавшегося на канале «СТС».
В 2006 снялась в эпизодических ролях в фильмах «Неваляшка», «Комната потерянных игрушек», в сериале «Сделка».
C 19 июля 2009 года вела с Марком Тишманом шоу «Сокровище нации» на Первом канале.