Джастин Чэмберс родился в Спрингфилде, штат Огайо, его отец был заместителем шерифа, а мать домохозяйкой. В 1993 году он женился на своей коллеге по модельному агентству Кейше. У пары пять детей, Изабелла (1994), близнецы Майя и Кайла (1997), Ева (1999) и Джексон (2002).
Чэмберс начал свою карьеру модели в Париже. Он работал в Европе, Японии и Соединенных Штатах для Calvin Klein, Armani и Dolce & Gabbana. После того как он решил начать актерскую карьеру он переехал в Нью-Йорк, где он обучался актерскому мастерству в HB Studios в течение четырех лет. В этот период он снялся в нескольких небольших ролях в сериалах «Другой мир», «Полицейские под прикрытием» и других. После этого последовали более заметные роли в фильмах «Свадебный переполох » (2001), «Мушкетёр», «Зодиак» и других. Снялся в нескольких эпизодах сериала «Детектив Раш» а после получил свою самую известную роль в сериале «Анатомия страсти» где и снимается по настоящее время.