Дженнифер Эспозито родилась 11 апреля 1973 года в Бруклине. Её мать — дизайнер, отец работал консультантом по продажам компьютеров, затем музыкальным продюсером. Училась в школе Святой Терезы и в католической школе Мура на Статен-Айленде. Занималась в актёрской студии в Нью-Йорке, подрабатывала официанткой.
В 1995 году первой актёрской работой Эспозито стала эпизодическая роль в мыльной опере канала ABS «Город», после чего актриса стала эпизодически сниматься в сериала и независимых фильмах. Известность пришла к ней после роли Стэйси Патерно, секретаря мэра в комедийном сериале «Спин-Сити», в котором она начала сниматься в 1997 году. Эспозито активно участвовала вместе с сценаристами сериала в разработке образа своего персонажа, но через полтора года покинула проект ради съёмок в большом кино. К этому времени она успела сыграть барменшу в фильме ужасов «Я всё ещё знаю, что вы сделали прошлым летом» и сыграть певицу Руби в фильме Спайка Ли «Кровавое лето Сэма».
В начале 2000-х годов Эспозито много снималась в кино, играла в основном роли второго плана. В 2004 года она сыграла роль девушки полицейского, героя Дона Чидла, в фильме «Столкновение», удостоенного премии «Оскар». С 2005 по 2006 годы Эспозито играла одну из ведущих ролей в сериале «Связанные», рассказывающем от четырёх сёстрах, живущих в Бруклине. Сериал не был продлён на второй сезон. Затем, с 2007 по 2009 годы, Эспозито снималась в комедийном сериале «Кто такая Саманта?», где играла роль лучшей подруги Саманты, героини Кристины Эпплгэйт. С 2010 года она играет роль детектива Джеки Куратолы в полицейском сериале «Голубая кровь».
В 1996—1997 годах Эспозито встречалась с актёром Бенджамином Брэттом. В 2005 году она начала встречаться с актёром Брэдли Купером, 30 декабря 2006 года вышла за него замуж. В апреле 2007 года пара подала на развод, который был официально оформлен в августе того же года.