Джон Мейолл родился 29 ноября 1933 года в Мэклсфилде, графство Чешир в семье Мюррея Мейолл, гитариста и фанатика джаза. С ранних лет Джон заинтересовался музыкой американских блюзменов (Ледбелли, Алберта Аммонса, Пайнтопа Смита, Эдди Лэнга), самостоятельно научился играть на фортепиано, гитаре и губной гармонике. В 1949—1951 годах Мейолл учился в Манчестерском художественном колледже (что позволило ему впоследствии самостоятельно оформлять обложки некоторых своих альбомов), а в 1951—1954 годах проходил службу в Британской Армии, приняв участие в Корейском конфликте. Тема войны стала позже одной из основных в его творчестве. В 1956—1962 годах Мейолл участвовал в группах The Powerhouse Four и The Blues Syndicate, совмещая занятия музыкой с карьерой профессионального дизайнера.
В 1963 году Мейолл при активном участии Алексиса Корнера переехал в Лондон и создал группу John Mayall's Bluesbreakers. С приходом в группу Эрика Клэптона и созданием первого хитового альбома Blues Breakers with Eric Clapton (1966) началось восхождение The Bluesbreakers к славе. Гитара Клэптона на этом альбоме признается критиками одним из наиболее искренних периодов его творчества. В следующем альбоме А Hard Road (1967) Эрика Клэптона заменил Питер Грин, привнёсший в музыку Bluesbreakers другое звучание (ближе к чикагскому блюзу) благодаря своему характерному стилю игры на гитаре. На третьем альбоме Bluesbreakers Crusade (1967) уже получила «путёвку в жизнь» гитара Мика Тейлора, который впоследствии заменил в Rolling Stones в качестве гитариста Брайна Джонса.
В числе других известных музыкантов, сотрудничавших с Мейоллом, были Джон Макви, Мик Флитвуд, Джек Брюс, Дон «Шугакейн» Харрис, Ларри Тейлор, Джон Хайзман, Дик Хекстолл-Смит, Энди Фрейзер, Джонни Алмонд, Коко Монтойа, Бадди Уиттингтон.
В конце 70-х Мейолл переехал в город Лорел Кэньон, Калифорния и постепенно отошел в своем творчестве от традиционного электрик-блюза, обогатив свою музыку джаз-, фанк-, поп-элементами. В 1982 году он вновь собрал Bluesbreakers с Миком Тейлором, Джоном Макви и Колином Алленом и провел краткое турне. Год спустя в состав группы вошли гитаристы Уолтер Траут и Коко Монтойа, басист Бобби Хэйнс и ударник Джо Йюл. В 2003 году многие музыканты первых составов вернулись в группу вновь — чтобы дать концерт, посвященный празднованию 70-летия Джона Мейола.