И. Грегори была младшей дочерью в аристократической семье лендлорда англо-ирландского происхождения; её мать, Фрэнсис Барри, была родственницей Стэндиш Хайеса О’Грэди, 1-го виконта Гилмора. Владение семьи Роксборо занимало территорию в 24 км?, однако поместье впоследствии, во время Ирландской гражданской войны (1922-23) было сожжено и разграблено. И. Грегори получила домашнее образование, обогащённое рассказами её ирландской воспитательницы, католички, открывшей для девочки волшебный мир кельтских легенд и преданий. Это тем более повлияло на развитие Грегори, что в родовом поместье не было библиотеки, а мать девочки, строго придерживавшаяся норм протестантизма, запрещала дочери читать романы и проч. до достижения ею 18-летия. В 1880 году Изабелла выходит замуж за сэра Уильяма Генри Грегори, бывшего губернатора Цейлона и члена парламента, владельца поместья Кул-парк близ города Горт. Сэр Уильям был на 35 лет старше своей супруги, однако обладал широкими познаниями в областях литературы и искусства, владел великолепной библиотекой, был прекрасно образован. Семья Грегори владела также домом в Лондоне и поддерживала дружеские отношения с такими выдающимися деятелями английской и ирландской культуры, как Роберт Браунинг, Уильям Батлер Йейтс, Альфред Теннисон, Генри Джеймс, Джон Эверетт Милле. Супруги Грегори имели единственного сына, Роберта, родившегося в 1881 году, служившего в британской авиации и погибшего во время Первой мировой войны. Узнав о смерти Роберта Грегори, У. Б. Йейтс посвятил ему свои стихотворения «An Irish Airman Forsees His Death» и «In Memory of Major Robert Gregory».
Семья Грегори много путешествовала: они посетили Цейлон, Египет, Испанию, Индию, Италию. Во время этих поездок И. Грегори познакомилась и влюбилась в молодого английского поэта Уилфрида Бланта, и написала по этому поводу ряд стихотворений - «Женские сонеты», которые впоследствии Блант опубликовал под своим именем. В 1882 выходит в свет первое произведение И. Грегори, памфлет Arabi and His Household, посвящённый политическим событиям в Египте. В 1880-х — начале 1890-х годов писательница создаёт серию коротких рассказов и книгу своих детских воспоминаний «Дневник эмигранта» («An Emigrant’s Notebook»), которые, впрочем, не были опубликованы. После смерти мужа в 1892 году у И. Грегори вновь возникает интерес к ирландской культуре, языку и фольклору. Она организует преподавание ирландского языка в местной школе, начинает собирать и обрабатывать ирландские сказки и легенды. Как результат этой работы выходит серия книг с рассказами по ирландской истории и мифологии: A Book of Saints and Wonders (1906), The Kiltartan History Book (1909), и The Kiltartan Wonder Book (1910). Грегори записала, обработала и издала ряд легенд на местном, англо-ирландском диалекте, распространённом в окрестностях поместья Кул-парк: Cuchulain of Muirthemne (1902) и Gods and Fighting Men (1904). Предисловие к первой из них написал У. Б. Йейтс. Постепенно, по мере изучения ирландской истории и фольклора, писательница всё сильнее подпадает под влияние ирландского национализма.
В 1899 году леди Грегори, вместе с некоторыми другими литераторами, создаёт Ирландский литературный театр просуществовавший до 1901 года и закрывшийся ввиду финансовых сложностей. В 1904 году И. Грегори, У. Б. Йейтс, Джон Синг, Джордж У. Расселл, Энни Хорниман, Уильям и Фрэнк Фрей организуют Ирландское национальное театральное общество. Общество покупает для своих нужд два здания в Дублине на Мальборо-стрит и Лоуэр-Эбби стрит и создаёт в них ирландский Эбби-театр, которым леди Грегори руководит до 1928 года. За это время она пишет около 40 драматических произведений для своего театра. В 1919 году Грегори играет на сцене в главной роли в трёх постановках спектакля Cathleen Ni Houlihan.
Через 3 месяца после смерти писательницы (она скончалась в возрасте 80-ти лет от рака груди) её имущество из имения Кул-парк было распродано с торгов, а само здание, с которым была тесно связана история ирландского литературного возрождения Irish Literary Revival, пришло в полное запустение и в 1941 году было снесено.