На музыкальной сцене Хорн дебютировала в 16-летнем возрасте в знаменитом нью-йоркском клубе «Cotton Club», где некоторое время выступала певицей в вечерних шоу. После переезда в Голливуд она появилась в эпизодических ролях во многих кинокартинах, наиболее заметными из которых стали «Хижина на небесах» (1943) и «Дождливая погода» (1943). В конце 1940-х годов из-за своих левых политических взглядов и появления периода Красной угрозы, Лена Хорн попала в Чёрный список Голливуда и в последующие годы её с трудом удавалось найти работу.
В 1950-х годах Лена Хорна вернулась к выступлениям в ночных клубах, стала периодически появляться на телевидении, а также записала несколько музыкальных альбомов. В августе 1963 года она приняла участие в акции протеста Марш на Вашингтон. В марте 1980 года Хорн заявила о своём уходе со сцены, хотя после этого успешно выступила в музыкальном ревю «Лена Хорн: Леди и её музыка», который ставился на Бродвее более 300 раз, и принёс певице две премии «Грэмми».