Эдит Маргарет Эмили Эшкрофт родилась 22 декабря 1907 года в городе Кройден на юге Англии. Училась в местной средней школе, затем — в лондонской Центральной школе речи и драмы у Фогерти. По окончании Школы Эшкрофт разделила со своим одногодкой Лоуренсом Оливье награды лучшему студенту и студентке. В 1926 году актриса дебютировала в Бирмингемском репертуарном театре. Первого успеха Эшкрофт добилась ролями в пьесах «Еврей Зюсс» Пауля Корнфилда (1929) и «Отелло» Шекспира (1931). Настоящая популярность к ней пришла в 1934 году, после того как Пегги сыграла Джульетту в постановке «Ромео и Джульетта» (вместе с Лоуренсом Оливье и Джоном Гилгудом, исполнявших роли Ромео и Меркуцио попеременно). В 1928—1933, 1940, 1950—1951 годах выступала в театре «Олд Вик». С момента основания Питером Холлом в 1960 году в Стратфорде-на-Эйвоне Королевского шекспировского театра была его ведущей актрисой.
В 1951 году Эшкрофт был присвоен титул Командор Британской империи, а в 1956 году она была введена в ранг Дамы Командор.
Телевизионные и кинороли Эшкрофт были редкими, но запоминающимися. Одним из первых фильмов с её участием был «39 ступеней» в 1939 году Наиболее известной стала её роль в фильме «Поездка в Индию» в 1984 году. За исполнение миссис Мур актриса была удостоена премии «Оскар», за «Лучшую женскую роль второго плана», став при этом самой пожилой актрисой, удостоенной это премии — Эшкрофт было 77 лет. На церемонии вручения она лично не появилась и «Оскар» от её имени приняла Анджела Лэнсбери. Эта же роль принесла ей годом позже премию «Золотой глобус».
На телевидении известной стала её роль в британском минисериале «Драгоценности в короне», за которую актриса получила премию «BAFTA», как «Лучшая телевизионная актриса».
Эшкрофт трижды была замужем. Её первым мужем был Руперт Харт-Дэвис (1929—1933), вторым — режиссёр Фёдор Комиссаржевский (1934), а третьим — Джереми Хатчинсон (1940—1965), от которого она родила двоих детей.
Пегги Эшкрофт умерла в Лондоне 14 июня 1991 года в результате инсульта в возрасте 83 лет. Её имя было увековечено на мемориальной доске в Вестминстерском аббатстве.