Погиб 4 сентября 2006 года на съёмках очередной телепередачи, получив смертельный удар ската-хвостокола в область сердца. День его смерти в Австралии считается всеобщим днём скорби.
Стив Ирвин начинал с того, что с детства ловил крокодилов в окрестностях Квинсленда для парка рептилий своих родителей. C 1991 года Стив Ирвин продолжил семейный бизнес и вскоре создал первые серии фильма «Охотник за крокодилами» (Crocodile Hunter), который стал популярным во всем мире. В этом году Ирвин был награждён за вклад в австралийскую туристическую индустрию. Премией были отмечены заслуги Ирвина по популяризации Зелёного Континента в документальных фильмах о дикой природе и созданию зоопарка «Австралия».
Неоднократно Ирвин бывал в ситуациях, когда его жизнь буквально висела на волоске. У него было большое количество ранений, полученных при контактах с животными.
Как рассказывал Стив Ирвин, в первый раз он получил серьёзное повреждение в начале 90-х, когда нырнул с носа лодки на крокодила. Крокодил сидел на скале, о которую Ирвин ударился плечом, и камень разбил его до кости. Кость разрезала все важные мускулы, связки и сухожилия.
В другой раз в Восточном Тиморе он спасал крокодила, который попал в бетонную трубу, и не было никакого способа вытащить его оттуда. Поэтому Ирвин нырнул внутрь вместе с животным. Крокодил схватил его мёртвой хваткой, в результате была вновь вспорота та же рука, и на этот раз разорвалось сухожилие.
Однажды Ирвина ударил по голове крокодил, которого он поймал под водой. Затем его колени и голени порезало, когда он скакал на 4-метровом крокодиле. В другой раз по дороге на съёмки ему пришлось спасать кенгуру на обочине дороги. Когда он подошёл к животному, кенгуру ударил его и рассёк губу пополам.
Несмотря ни на что, Стив Ирвин продолжал снимать фильмы. «Если ты не можешь посмеяться над собой, значит ты слишком правильный и твоя жизнь слишком скучна», — говорил он.
У Стива Ирвина остались двое детей, Бинди Сью и Боб Кларенс. Его жена Терри ассистировала ему на съёмках.
Впервые программа «Охотник на крокодилов» вышла в эфир в 1992 году. Стив сумел превратить свой имидж бесстрашного и полного энтузиазма любителя поизучать фауну в близком контакте в торговую марку, и его сериал с большим успехом шел по всему миру по каналу Discovery.
4 сентября 2006 года в 11 утра Стив Ирвин спустился с аквалангом под воду, чтобы снять больших хвостоколов у Большого Барьерного рифа. Он занимался сбором материала для своего очередного фильма «Смертельно опасные существа океана». Ведущий уже много раз спускался к скатам. В принципе, этот хищник редко бывает по-настоящему опасен для человека: у берегов Австралии зафиксировано всего два случая гибели туристов, ужаленных скатами.
Но, видимо, Стив слишком часто дразнил свою смерть. Одна из рыб напала на ведущего, когда тот находился над ней. Скат поднял свой хвост с ядовитым жалом на конце и ударил им в грудь Стива. Жало попало точно в грудь натуралиста. Оператор, который плыл вслед за Стивом Ирвином, заснял его смерть на видеоплёнку. Позже она была передана жене Стива — Терри, она решила её уничтожить.
Премьер Квинсленда Питер Битти предложил провести похороны на государственном уровне. Но семья решила, что в таких похоронах нет необходимости, ее поддержали многие австралийцы. Отец Стива Боб Ирвин заявил, что его сын не хотел бы таких почестей и хотел, чтобы его помнили, как «простого парня». Натуралист был похоронен 9 сентября на закрытой церемонии в австралийском зоопарке, где он работал. Могила недоступна для посетителей.
Его смерть несколько раз пародировалась в мультсериале South Park, что вызвало негативную реакцию родственников.
В честь Стива Ирвина названо судно SSCS (Sea Shepherd Conservation Society)
В 2009 году в честь Ирвина была названа редкая горная тропическая улитка — Crikey steveirwini Stanisic, 2009.
Elseya irwini (Элсея Ирвина) Эту черепаху назвали в честь ее 'cо-исследователя', знаменитого зоолога Стива Ирвина. Отец Стива Ирвина, Боб Ирвин, сначала поймал животное во время семейной поездки в 1997. Они никогда не видели такую черепаху прежде.
Дочь Стива и Терри, Бинди Сью Ирвин, на самом деле названа в честь любимого крокодила Стива, Бинди, и его собаки Суй, которая, кстати, неоднократно появлялась в фильме «Охотник за крокодилами» (Crocodile Hunter) (1996), эпизоды со Стивом и Терри.
Второй ребенок, Роберт Ирвин Кларенс, назван в честь отца Стива, Роберта, и отца Терри, Кларенса.