Родилась в семье портного и пивовара. В 1633 была принята в Гильдию Святого Луки — союз художников Харлема. В 1636 вышла замуж за художника Моленара, переехала в Амстердам. Родила пятерых детей. Преобладающая часть её работ относится к 1629—1635.
Автор портретов, натюрмортов, произведений жанровой живописи, в которых ощутимо влияние Франса Халса (есть предположения, что Лейстер была его ученицей) и караваджистов утрехтской школы (Г. ван Хонтхорст, Х.Тербрюгген). Стала первой женщиной в рядах членов харлемской Гильдии Святого Луки. Несколько её полотен изображают женщин за домашними занятиями, что было новым для живописи 1620—1630-х годов.
Работы Юдит Лейстер представлены во многих крупных музеях Европы и США.